New Techi täisautomaatne nukleiinhapete ekstraheerimise ja tuvastamise masin

Viis tugevust:
● Seade on konfigureeritud nukleiinhappe ekstraheerimise ja puhastamise etapiga
● Ultraheli eemaldamise mooduliga konfigureeritud instrument
● Seade on konfigureeritud täisautomaatseks
● Seade on konfigureeritud muutuva temperatuurivõimendusega
● Seade on konfigureeritud täielikult suletud reaktiivikomplektiga

1. Kas nukleiinhapete tuvastamise reaktiive tuleb ekstraheerida ja puhastada?
Nukleiinhapete tuvastamise põhimõte on järgmine: praimeri toimel kasutatakse DNA polümeraasi, et teostada DNA/RNA ahelreaktsiooni amplifikatsiooni (nõuab NA pöördtranskriptsiooni) ja seejärel tuvastatakse vabanenud fluorestseeruva signaali hulk, et määrata. kas proov sisaldab tuvastatava patogeeni nukleiinhapet (DNA/RNA).

1) Proovid, mida ei ole ekstraheeritud või puhastatud, võivad sisaldada paljusid komponente, mis mõjutavad lõpptulemust: nukleaas (mis võib lahustada sihtnukleiinhappe ja põhjustada valenegatiivset), proteaas (mis võib vähendada DNA polümeraasi ja põhjustada valenegatiivset), raskmetall sool (mis viib süntaasi inaktiveerimiseni ja põhjustab valepositiivse), liiga happeline või liiga aluseline PH (mis võib põhjustada reaktsiooni ebaõnnestumise), mittetäielik RNA (viib valenegatiivse pöördtranskriptsiooni ebaõnnestumiseni).

2) Mõningaid proove on raske otse amplifitseerida: grampositiivsed ja mõned parasiidid oma paksude rakuseinte ja muude struktuuride tõttu, kui nad ei läbi nukleiinhappe ekstraheerimise ja puhastamise protsessi, võib ekstraheerimisvaba komplekt ebaõnnestuda. proovid.

Seetõttu on soovitatav valida testikomplekt või instrument, mis on konfigureeritud nukleiinhappe ekstraheerimise etapiga.

2. Keemiline ekstraheerimine või füüsikaline ultraheli killustamine?
Üldiselt saab keemilist ekstraheerimist kasutada enamiku eeltöötluse ja puhastamise puhul.Kuid paksuseinaliste grampositiivsete bakterite ja mõnede parasiitide puhul ei saa keemilise ekstraheerimisega saada tõhusaid nukleiinhappemalle, mille tulemuseks on valenegatiivne tuvastamine.Lisaks kasutatakse keemilisel ekstraheerimisel sageli tugevaid aineid, kui elueerimine ei ole põhjalik, on lihtne reaktsioonisüsteemi viia tugevat leelist, mille tulemuseks on ebatäpsed tulemused.

Ultraheli killustamine kasutab füüsilist purustamist, mida on edukalt kasutanud GeneXpert, juhtiv ettevõte POCT-valdkonnas inimkasutuses ja millel on absoluutne eelis mõnede keerukate proovide (nt Mycobacterium tuberculosis) nukleiinhapete ekstraheerimisel.

Seetõttu on soovitatav valida testkomplekt või instrument, mis on konfigureeritud nukleiinhappe ekstraheerimise etapiga.ja see on optimaalne, kui on olemas ultraheli eemaldamise moodul.

3. Käsitsi, poolautomaatne ja täisautomaatne?
See on tööjõukulu ja töötõhususe probleem.Praegu on lemmikloomahaiglad, kus pole piisavalt töötajaid, ning nukleiinhapete ekstraheerimine ja tuvastamine nõuab teatud oskusi ja kogemusi.Pole kahtlust, et täisautomaatne nukleiinhapete ekstraheerimise ja tuvastamise masin on ideaalne valik.

4. Kas pidev temperatuuri võimendus või muutuva temperatuuri võimendus?
Amplifikatsioonireaktsioon on nukleiinhappe tuvastamise lüli ja selle lüliga seotud professionaalne tehnoloogia on keeruline.Jämedalt öeldes kasutatakse nukleiinhappe amplifitseerimiseks ensüüme.Võimendamisprotsessis tuvastatakse võimendatud fluorestsentssignaal või sisseehitatud fluorestsentssignaal.Üldiselt võib öelda, et mida varem fluorestsentsi signaal ilmub, seda suurem on proovi sihtgeeni sisaldus.

Konstantse temperatuuriga amplifikatsioon on nukleiinhappe amplifikatsioon fikseeritud temperatuuril, muutuva temperatuuriga amplifikatsioon aga tsükliline amplifikatsioon, mis toimub rangelt vastavalt denatureerimisele-anniilimisele-pikenemisele.Konstantse temperatuuri võimendusaeg on läbi viidud, samas kui muutuva temperatuuri võimendusaega mõjutab suuresti instrumendi temperatuuri tõusu ja languse kiirus (praegu on paljud tootjad suutnud teha 40 võimendustsüklit umbes 30 minutiga).

Kui laboratoorsed tingimused on head ja tsoneerimine on range, siis on mõistlik väita, et täpsuse erinevus nende kahe vahel ei ole suur.Kuid muutuva temperatuuriga amplifikatsioon sünteesib suhteliselt lühema ajaga rohkem nukleiinhappeprodukte.Laborites, kus puudub range tsoneerimine ja professionaalse väljaõppega personal, on nukleiinhappeaerosoolide lekke oht suurem, valepositiivne tulemus ilmneb pärast leket ja seda on äärmiselt raske kõrvaldada.

Lisaks on konstantse temperatuuri amplifikatsioon kalduvus ka mittespetsiifilisele amplifikatsioonile, kui proov on keeruline (suhteline reaktsioonitemperatuur on madalam ja mida kõrgem on pikenemise temperatuur, seda parem on praimeri seondumisspetsiifilisus).

Mis puutub praegusesse tehnoloogiasse, siis muutuva temperatuuriga võimendus on usaldusväärsem.

5. Kuidas vältida nukleiinhappe amplifikatsiooniproduktide lekkimise ohtu?
Praegu valivad paljud tootjad nukleiinhappe reaktsioonitoruks näärmetüüpi PCR-toru, mis suletakse hõõrdumise teel ja muutuva temperatuuriga denaturatsiooni temperatuuridenaturatsioon muutuva temperatuuriga PCR-amplifikatsioonis ulatub 90 kraadini.
Celsiuse järgi.Korduv kuumusega paisumine ja külmaga kokkutõmbumine on PCR-toru tihendamisel suur väljakutse ning näärmetüüpi PCR-toru leket on suhteliselt lihtne põhjustada.

Reaktsiooniprodukti lekkimise vältimiseks on eelistatav läbida reaktsioon täielikult suletud komplekti/toruga.Oleks ideaalne, kui oleks võimalik välja töötada täielikult suletud komplekt nukleiinhapete ekstraheerimiseks ja tuvastamiseks.

Seega on New Techi uuel täisautomaatsel nukleiinhapete ekstraheerimise ja tuvastamise masinal ülaltoodud viis optimaalset valikut.